最新情報！！　温故知新　健康食品−トリプトファン事件(その後）2007.4.1Update　もご覧ください

    関節痛　　　　 ７３％
  　紅斑　　　　　 ６０
　  末梢浮腫　　　 ５９
  　咳嗽･呼吸困難　５９
　  発熱　　　　　 ３６
　　皮膚硬化様変化 ３２
　　眼瞼浮腫　　　 ２８
　　脱毛           ２８
　　神経障害　　　 ２７
　　肝腫大　　　   　５
　　脾腫　　　　 　　１　　

　　�A　ＥＭＳの検査所見

    白血球増加　　　　　８５％
    血清aldorase値上昇　４６
　　肝機能値上昇　　　　４３
　　血沈亢進　　　　　　３３
　　胸部Ｘ線異常陰影　　２１
　　　　　　浸潤影　　　１７
　　　　　　胸水貯留影　１２
 　血清ＩｇＥ値上昇　 　１７
 　血清ＣＰＫ値上昇　　 １０

　　�B　ＥＭＳの病理所見
　１０例の患者の筋生検を行った結果

 　筋膜炎 　　　　　　　　１０例
 　筋周囲炎　　　　　　　 １０
 　炎症性閉塞性毛細血管炎 　８
 　筋周囲繊維化　　　　　　 ７
 　脱神経性筋萎縮   　　　　７
 　再生繊維の散在　　　　　 ６
 　白筋の繊維萎縮　　　　　 ５
 　筋内膜炎　　　　　　　 　５
 　中心核の増加　　　　　　 ４
 　筋周囲結合組織のフィブリノイド壊死　３
 　孤立性壊死性繊維　　　　 １

　（９）　治療
　トリプトファン製品の摂取を中止することが第一。中止しても症状が改善しない場合や重傷者にはステロイド剤が用いられる。ステロイド剤の中止により症状が再発することも多い。血漿交換や免疫抑制剤についてははっきりした効果は認められていない。
　（１０）　類似疾患
　ＥＭＳは１９８１年スペインで発生したtoxic oil syndromeに類似している。これは発熱、筋痛、胸部Ｘ線浸潤影、好酸球増加、血中aldorase値上昇などをきたす症候群である。この疾患は、不法に売られた油を食用に摂取した人々の間で発生した。患者数は約２万人、死者は３００人以上。原因物質は油に含まれたアニリン誘導体と考えられたが、その発生機序はいまだ不明である。
　（１１）　動物モデル
　動物モデルにおいてＥＭＳを発生させた報告はほとんど知られていない。
　（１２）　トリプトファン製品中の不純物
　　明確にこれが原因物質だと判明した物質はない。
　しかし、ＥＢＴ（1，1'-ethylidenebis［L-tryptophan］）という物質及びＰＡＡ（3-(phenylamino)alanine）が精力的に研究されており、ＥＭＳへの関与が疑われている｡

３　内山氏のトリプトファンによるＥＭＳに関する総説
　以下は日本における研究内容である。１９９０年５月に厚生省に原因究明委員会が設置され、更に厚生科学研究班による研究が続いている。また国際共同研究も行われた。

３−１　化学分析に関する研究成果
　（１）　検体
　　当時の国立衛試では、昭和電工より４０種類のトリプトファン製品を入手した。そのうち１２種は、アメリカＣＤＣにより発症関連と認定されたロット（事故品トリプトファン）であった。
　（２）　不純物
　高速液クロにより不純物は２８ー３７個検出された。発症に関連したロットと対照品のロットの比較により、２つの不純物がクローズアップされた。前述のＥＢＴ及びＰＡＡである。
　（３）　不純物の除去
　多くの副生成物は、発酵工程に遺伝子組換えを行った菌株を導入したり、精製工程を簡略化したりした結果できたものと考えられる。これら不純物は、適当な精製法により劇的に減少することから、ＥＭＳの病因に精製工程が決定的役割を果たしていると考えられる。
　事故品トリプトファンでも不純物の総計は０、５％以下であり、純度は９９、６％以上であって、医薬品や食品添加物の公的規格に適合するものであった。その後、ドイツ薬局方ではＥＢＴ含量が８ｐｐｍとされ、不純物総量も分類により１００ｐｐｍ、３００ｐｐｍと設定された。

３−２　体内分布及び代謝
　（１）　ＥＢＴ　（1，1'-ethylidenebis［L-tryptophan］）
　ＥＢＴは胃液で速やかに分解すると言われているが、２５％が未分解のまま排泄されたとする研究結果もある。
　ラットに対し５０ｍｇ／ｋｇ投与し、一部吸収され、１時間後血漿中に１３６ｎｇ／ｍｌ検出された。
　（２）　ＰＡＡ　（3-(phenylamino)alanine）
　ＰＡＡは体内で、分解されずに吸収されると推定される。投与後の血漿中の濃度はＥＢＴの２５倍と報告されている。また、体内分布は脳内濃度が最も高いことが特筆され、ついで腎臓、肺、肝臓の順である。
　ＰＡＡが広範に組織に取り込まれ、組織内濃度が循環血と平衡関係にあることは、一般アミノ酸と輸送体を共用する可能性を示唆する。一方、高濃度・長時間の組織滞留は著しく低い代謝・腎クリアランスを示唆し、蛋白への取り込みや蛋白の合成阻害までも含め検討を要するところである。　
　ラットにおける、体内正常アミノ酸レベルの変化の有無を追及した報告がある。ＰＡＡ投与後の内在アミノ酸レベル応答としては、芳香族・分子鎖アミノ酸の撹乱が著明に観察された。血液や各組織に広範に、ＰＡＡ濃度の増減と鏡像的にこれらアミノ酸の減少・回復が認められた。

３−３　動物実験によるＥＭＳの再現
　人に見られた症状を動物を用いて再現することにより、発症の機序を明らかにしようとする試みは多数行われたが、いずれも成功していない。Lewis系ラットに事故品トリプトファンを投与して、ＥＭＳと同じような筋膜炎や筋周囲炎を生じることを観察したが、好酸球増多は見られていない。

３−４　不純物の生理作用
　（１）　ＰＡＡの脳内投与
　ラットの脳内にＰＡＡを注入すると好酸球増多が起こった。
　ラットの視床下部視交差上核にＥＢＴを８日間連続投与すると、摂水リズムが変化し、明状態でもよく摂水するようになった。
　ＥＢＴとL-トリプトファンを脳室に同時投与すると、著明に好酸球が増加し、ＥＭＳ患者において、ＥＢＴによる好酸球の増加が、中枢支配の機構を介して行われている可能性が示唆された。
　（２）　不純物による自己免疫の可能性
　ＥＭＳの臨床・病理像は、好酸球増加性筋膜炎など自己免疫疾患に類似していること、また、ＥＭＳの患者血清から好中球細胞質抗体が認められた、との報告もあることから、ＥＭＳ発症に際して、ＥＢＴ，ＰＡＡなどの不純物に対する抗体が作られ、それが関与している可能性も考えられる。
　ウサギに対し皮下免疫法により、ＥＢＴに対する抗体が産生された。ＰＡＡでは産生されなかった。
　（３）　サイトカイン関連の生体影響
　ＥＭＳの特異的病態である好酸球増多並びに好酸球の組織内浸潤には、各種のサイトカイン類の関与が考えられる。
　　１）Ｔ細胞のインターロイキン-５誘導
　　ＥＢＴは健康人の脾Ｔ細胞のインターロイキン-５（ＩＬ-５）を誘導することが証明された。この反応は、好酸球増多の機構の一つとも考えられる。
　　２）好酸球の遊走能への影響
　　　ＥＭＳの病体形成における特徴に、心筋周辺組織への好酸球の大量の集積現象がある。ＥＢＴはヒト末梢血単核球を刺激して好酸球遊走惹起活性を産生し、この活性がＰＡＦやＧＭ-ＣＳＦを介していることが判明した。
　　３）ＩＬ−８関連の知見
　　インターロイキン-８（ＩＬ-８）は元来“好中球”の遊走、脱顆粒を惹起させるサイトカインであり、血管内皮、マクロファージなどから産生される。が、“好酸球”は通常状態ではＩＬ-８に対する受容体が無いためＩＬ-８には全く反応しない。
　斎藤らは、ＥＭＳを好酸球集積を伴う全身の強い反応として捕らえ、好酸球自身の性状が健常者に比較し異常を来しているのではないかと考えた。そこで、気管支喘息患者の末梢血から精製した好酸球を、２４時間事故品トリプトファン、ＥＢＴ，ＰＡＡと培養したところ、ＩＬ-８により著明に好酸球遊走の亢進が見られた。これはＥＢＴ、ＰＡＡ刺激を受けた好酸球上に、ＩＬ-８に対する受容体が新たに発現することによるものと考えられている。

３−５　食品衛生学的考察
　ＥＭＳは食品の通常成分あるいは必須成分の過剰摂取に、その他のいくつかの要因が重なって、重大な健康障害をもたらした典型的な例である。特に、問題となったトリプトファン製品がいずれも日本薬局方、食品添加物公定書、アメリカ薬局方などの公的規格には適合する製品であったこと。また、通常ではほとんど問題にされない１００〜２００ｐｐｍ濃度レベルの不純物が原因の一つとして働いていた。
　（1）　製造工程上の問題
　原料基質はアントラニル酸よりも葡萄糖の方が望ましかった。
　発酵に用いる微生物は、時期により遺伝子組換えを行った異なるストレインが用いられていた。
　活性炭カラムや逆浸透膜など精製工程を、中間製品の脱色度など肉眼的な判断により、選択省略など行っていた。精製工程は中間体の化学分析により管理すべきであり、不純物は代表的なもののみならずすべてについて、プロファイル分析により、常に監視されるべきである。ＧＭＰの概念が適用されていなかったところに問題があったと思われる。
　事故品ロット中のＥＢＴは、１５０〜２００ｐｐｍ、ＰＡＡは１００〜１５０ｐｐｍであったが、他のロットや他社製品中には、ＥＢＴ及びＰＡＡがほとんど検出されなかった。また、事故品ロットは、精製工程における活性炭が少なかったことが指摘されているが、それが原因となって、本来除去されるべきＥＢＴの残存量が、増加する可能性は大きい。一方、ＰＡＡは活性炭ではほとんど除去されずに残存するため、製造原料から、あるいは工程中での生成を抑止しなければ除去は難しいと考えられた。
　（２）　バイオテクノロジーなどの新技術により生産された食品の評価原則
　既存の食品についての、新規製造法の評価原則の提案がされた。
�@　食品の品質評価においては、注意すべき対象を既知の有害物質に限定せず、不特定不純物全般に及ぼすべきであること
�A　メインの製造方法の変更や、バイオテクノロジーにおける使用組換え体が変化した時は、特に、不純物のトータルプロフィルの変化に注目すべきであること。
�B　安全性評価においては、既存の天然物質との科学的同等性確認を重視すべきこと。
�C　製造目的成分が単一物質である場合には、技術の許す限り精製操作を十分に施しておくべきこと
�D　不純物への配慮は、通常０．１％を目標に行われるが、食品の摂取量が医薬品などに比べて多いことを考慮すると、０．０１％を目標とすべきであること
�E　極めて困難なことであるがハイリスクグループへの影響も常に念頭に置くべきこと

４　おわりに
　（１）　トリプトファン事故を教訓とした、内山氏のバイオテクノロジー利用食品に対する最終的な結論は、見事な論理に貫かれている。特に�Dに述べられたように、食品は医薬品よりも摂取量が多いので更に０．０１％（１００ｐｐｍ）まで不純物を減らせ、という論理には感心した。普通の感覚では、医薬品は精製に精製を重ねたものとの認識で、食品は口から食べるから少々のことは大丈夫と考えるのに。
　平成３年１２月２６日に、｢組換えＤＮＡ技術応用食品・食品添加物の製造指針・安全性評価指針について｣　という文書が、厚生省生活衛生局長名で通知されている。内容は私の理解を超えているが、この指針の中に、不純物については０．０１％までチェックするようにというような、文言はない。
　（２）　トリプトファン事件を受けて、厚生省新開発食品保健対策室から、「アミノ酸を含有する健康食品の取扱について｣という文書(平成２年３月３１日付）が、通知されている。　�@アミノ酸のバランスが悪い蛋白質の継続的摂取は、健康に悪影響　�A特定のアミノ酸を高濃度に含有させた健康食品を、継続的摂取すると、アミノ酸バランスをそこなう恐れがあるので注意すること。　�B健康食品については、そのアミノ酸スコアは、８５以上のものであること、特定のアミノ酸を高濃度に含有させたものでないことが望ましい、等が記載されている。
　文書内には、トリプトファンという文字は全くないので、私にはこの文書の存在はすでに記憶の外であった。トリプトファン事件を想像すれば内容がよく理解できるところだ。
　（３）　トリプトファン事件は、過去の重大事件−ＰＣＢ・カドミウム・砒素ミルクなどとは人体への作用機序がかなり違うようだ。上で見てきたように、サイトカイン、インターロイキンなどが関与しているが、これらは生体内の免疫反応、アレルギー反応に関連する物質である。食品衛生においては、今後このような免疫反応、アレルギーに関連する物質・食品への配慮も考えていかねばならない。
　（４）　ＩＳＯ9000という国際的な品質保証認定制度がある。自社の製品の品質保証を制度的に認定を受けるものである。しかしこの中でもっとも重要なのは、ＩＳＯ9000の認定を受けた、と大々的に宣伝することではなく、大丈夫ですか、と消費者からの質問に即座に安全の証明を出来ることである。我が保健所では平成３年より消費者啓発活動が行われてきており、今年度も２４名の食品衛生コミュニケーターを組織している。今年度は、｢この食品ここが気になる｣というテーマで食品を試買し、メーカーあてに質問状を出す調査活動を実施した。種々の質問に、丁寧な返事が返ってきた。
　遺伝子組換え食品についても、このような信頼関係に基づいた双方向性のある関係があればと考えるところだ。